超净工作台在猕猴桃组织培养繁殖与工厂化育苗实验中的应用

   植物组织具有无限增殖和产生不定芽、不定根的能力。在培养条件适宜时，用一个芽可以培养出许多植株来。其在保持优良砧木及品种种性、进行工厂化育苗方面具有很好的意义。其方法步骤如下。

    一、外植体接种与材料消毒

    取田间当年生新梢或一年生枝蔓，去叶，用肥皂水将表面刷洗，并用自来水冲洗干净，剪成一芽一段，放入干净烧杯，拿进超净工作台；先用70%酒精过一下，无菌水（用高压锅，在120℃下，灭菌30分钟的水）冲洗3遍；再用0.1%升汞液消毒5～10分钟，无菌水冲洗3遍；然后用酒精灯火焰消毒过的工具（镊子、剪刀、拨针、解剖刀等）剥去鳞片、叶柄，取出带数个叶原基的幼芽接入培养基，半包埋。

    培养基配好后装入广口的罐头瓶、三角瓶或试管，装入量为1～2厘米高。120℃灭菌30分钟后备用。

    外植体接种后放到培养室的培养架上培养。培养条件为：光照1000勒克斯，8～10个小时，暗14～16小时；温度25～28℃。培养1～2周，即可看出是否消毒彻底，有无感染。及时检查，将未感染的外植体转接到新的培养瓶内，丢弃已感染的外植体。

    二、继代繁殖

    上述接入的外植体培养1～2个月，即可长到2～3厘米长。在超净工作台上，将其剪成约1厘米长茎段，接种到新的培养基中（培养基的配方同上）。剪茎段时所用工具和培养皿（或牛皮纸）都要经过消毒，消毒方法分别同上述酒精灯消毒法和高压消毒法。

    其后，大约每25天左右进行一次继代培养。每次的茎段增殖量约为3～4倍。反复进行，直到所需数量。

    三、生根

    上述培养的茎段长到2厘米以上时，即可用于生根。生根培养基的成分为上述培养基的大量元素减半，除激素和蔗糖外，其他成分不变。

    生根培养基配好后也需高压灭菌（120℃，30分钟）后使用。

    生根培养20天左右，茎段上即可长出根，成为完整苗。生根苗长到3～5厘米长时即可锻炼、移栽。

    四、生根苗的锻炼、移栽

    （一）锻炼

    组培苗在人工培养条件下长期生长，对自然生长环境的适应性减弱。移栽前需要一个过渡阶段，即锻炼。锻炼方法为：将培养瓶移至自然光照下2～3天，打开瓶口2～3天，再移栽。

    （二）移栽

    移栽时先洗净根上培养基，避免培养基感染杂菌致苗死亡。移栽方法及灌水、遮阳等管理同实生苗移栽。但注意组培苗比较娇嫩，需轻盈操作。

    五、工厂化育苗

将上述培养基制备及超净工作台相关、装瓶、消毒、无菌苗增殖、生根、锻炼、移栽等过程全部放在实验室和温室中进行，即为工厂化育苗。目前，这样的生产线已在意大利和法国投入使用。但外植体接种尚需人工操作。

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