传递窗紫外灯表面消毒效果验证(SOP案例全文完整版)

目  录

1、概述... 3

2、实施日期及时间安排... 3

3、验证小组成员... 3

4、仪器和设备... 3

5、材料与试剂... 3

6、验证过程... 4

7、验证结果记录... 8

8、再验证周期... 9

9、相关SOP. 9

10、QA职责... 9

11、修改事项... 9

12、文档... 9

1、概述

进入净化车间的零配件或其它物品通过传递窗，进入微生物室的物品通过传递窗，经过紫外消毒后进入微生物室。为了确认传递窗紫外灯的消毒效果，特起草方案对其进行验证。本验证用于生产车间、微生物室、无菌室传递窗紫外灯表面消毒效果检查。

2、实施日期及时间安排

2007年月日开始进行验证。

3、验证小组成员

4、仪器和设备

5、器材

5.1灭菌刻度吸管（1ml，10ml）

5.2灭菌试管

5.3灭菌平皿

5.4酒精灯

5.5载体：（1.0×1.0cm的玻片）

6、材料与试剂

6.1纯化水 

6.2营养琼脂培养基

6.3改良马丁琼脂培养基

6.4营养肉汤培养基

6.5改良马丁培养基

6.6金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]

6.7枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]

6.8大肠杆菌[CMCC（B）44 102]

6.9白色念珠菌[CMCC（F）98 001]

6.10稀释液（0.1％吐温80，0.1％蛋白胨溶液）

7、验证过程

7.1 试验环境

    试验在洁净度10 000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行，全过程严格遵守无菌操作。单向流空气区、工作台面及环境定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

    每次操作开始前，开紫外灯照射1小时。

7.2 培养基的制备

7.2.1营养琼脂培养基
配方：

营养琼脂培养基粉 31.0g

纯化水            1000ml

配制：

根据需要量称取营养琼脂培养基粉置适宜容器中，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解，调pH至7.1±0.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌121℃×15分钟。

7.2.2改良马丁琼脂培养基
配方：

           改良马丁琼脂培养基粉   42.0g

纯化水                  1000ml

     配制：

根据需要量称取改良马丁琼脂培养基粉，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解，调pH至6.4±0.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌115℃×20分钟。

7.2.3营养肉汤培养基
配方：

           营养肉汤培养基   20g

纯化水            1000ml

配制：

称取营养肉汤培养基20克，加1000ml纯化水，加热溶解，加热至沸，冷却至常温，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌121℃×15分钟。

7.2.4改良马丁培养基
配方：

           改良马丁培养基粉   28.0g

纯化水              1000ml

配制：

根据需要量称取改良马丁培养基粉，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解，调pH至6.4±0.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌115℃×20分钟。

7.4 方法验证试验

7.4.1辐照强度测定

7.4.1.1开启紫外灯5min后，用中心波长为253.7nm的紫外线强度测定仪在灯管下方垂直1m的中心处测量其辐照度值（uW/cm²）。

7.4.1.2测量时，电压应稳定在220V。

7.4.1.3普通型或低臭氧型直管紫外线灯（30W），在灯管下方垂直1m的中心处，新灯管的辐照度值应≥90 uW/cm² 。使用中的灯管的辐照度值应≥70 uW/cm² ，低于此值者应予更换。

7.4.2照射剂量

表面消毒接受的照射剂量，应达杀灭目标微生物所需。对大肠杆菌，照射剂量应达到7.5×10³ uW·s/cm²,对金黄色葡萄球、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌应达到2.53×10⁴uW·s/cm²。

7.4.2.2照射剂量计算：

照射剂量（uW·s/cm² ）＝紫外灯管强度（uW/cm²）×时间（s）

7.4.3 细菌及其芽孢和真菌杀灭效果的测定

7.4.3.1菌液的制备   

金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、白色念珠菌培养后，将菌液进行活菌计数。

7.4.3.2 将灭菌载体平放于灭菌平皿内，每个载体滴注定量菌悬液，（载体回收菌量达5×10⁵～5×10⁶ cfu/片），涂匀，放37℃培养箱烘干。开启紫外灯5min后，将16个染菌玻片平放于灭菌平皿内，水平放于适当距离照射，于4个不同间隔时间（15min、30 min、45 min、60 min）各取出4个染菌玻片，分别投入4个盛有5ml洗脱液试管中，振打80次。

7.4.3.3经适当稀释后，取1ml洗脱液，作平板倾注，每个染菌玻片接种两个，细菌放30～35℃培养48小时作活菌计数，真菌放23～28℃培养72小时作活菌计数。

7.4.3.4阳性对照，除不做照射处理外，取4个染菌玻片，分别投入4个盛有5ml洗脱液试管中，振打80次。余按7.4.2.3同样操作。

7.4.3.5计算杀灭率

                          阳性对照回收菌数－试验组回收菌数

     杀灭率（％）＝                                            ×100％

                               阳性对照回收菌数

7.4.3.6判定标准     对指示菌杀灭率≥99.9％判为消毒合格。

8、验证结果记录：

附件1. 试验菌数量测定原始记录

8、再验证周期

传递窗构造或紫外灯管放置位置发生改变时。

9、相关SOP

参考：自净式传递窗验证过程中的性能确认

10、文档

所有的相关文档都应该保留至少5年，这些文档应包括如下内容：

原始方案、修改后的方案（如果有的话）、偏差报告、原始数据、原始报告和最终报告、其中，报告应该包括以下内容：

记录的原件（或复印件）、测试项目及条款、实验开始和结束的日期、材料和方法描述、出现的偏差描述（如果有的话）、实验结果。

整理：http://www.fenglins.com  黄贞民-13570963007