超净工作台在胡萝卜愈伤组织建立实验中的应用

一、 材料和设备

超净工作台或者无菌接种室

培养基 N6+2 mg/L 2,4-D

带有吸水纸的成套的培养皿，无菌水

解剖刀、枪型镊子、刀片

无病虫的胡萝卜直根数十个

消毒剂 0.2%的升汞溶液

70%酒精、95%酒精及70%的酒精棉球

l000毫升的玻璃烧杯数个、酒精灯、火柴、记号笔、小刷子（可用一次性牙刷）

二、实验材料 新鲜胡萝卜、胡萝卜愈伤组织

三、实验步骤'

1 选择无伤、无病、形状较规则的胡萝卜，用小刷子在流动的自来水下洗刷胡萝卜，除净表面所有的泥屑。可以根据实验的时期，选用其它的实验材料。

2 将胡萝卜切成大约 40 mm厚的片段,放入100或500 ml的烧杯中，倒入消毒液，将植物材料覆盖、浸泡10-30 min。在灭菌过程中，在每个材料上做好标记，并对应地放在预接种的培养基边上。接种后在培养瓶上标明培养物名称和培养日期。

3 在超净工作台上，倒掉消毒液，用无菌水冲洗3-5次，以便去除残留的消毒液。

4 取消毒过的胡萝卜放入已灭菌的带有滤纸的培养皿中，用无菌解剖刀从两端各切去10毫米，再将留下的胡萝卜直根切成一系列一毫米厚的横切片。取其中的一片转到另一个已灭菌的带有吸水纸的培养皿中，再将每一片切成小块，使其每个小块上均包含木质部、形成层和韧皮部，外植体的大小要尽量一致。

5 接种 取下培养瓶的塞子（或锡铂纸），用火灼烧瓶口2 cm处，手持培养瓶呈45º角，用消毒镊子把4-8块外植体转到琼脂培养基的表面，注意把靠近根尖的一面接触培养基。然后立即将烧过的封口棉塞或锡铂纸封住瓶口。每两次转移之间都要用酒精灯灼烧镊子，防止带菌。

6 培养 接种好的外植体在25℃的培养箱中，黑暗条件下培养四周左右就会形成一块较大的愈伤组织。

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