超净工作台在康乃馨的离体快繁的应用

一、 仪器设备和试剂

超净工作台、带有吸水纸的成套的培养皿，无菌水

培养基 N6+1 mg/L 6-BA

剪刀、枪型镊子

量筒、酒精灯、滤纸、蒸馏水、小刷子

95%乙醇、70%酒精、70%酒精棉球、0.2%升汞、甲醛、高锰酸钾、来苏尔

纱布、棉塞、牛皮纸、才培纯、肥皂、酒精喷壶

植物的嫩茎、侧芽、茎尖、叶片、花、愈伤组织上的不定芽、胚状体、试管苗等

二、实验材料 康乃馨枝条

三、方法和步骤

1 外植体灭菌 取从市场上购买的康乃馨枝条，去掉大的叶片，剪取带腋芽的节结，用肥皂（洗洁精）清洗表面，再用自来水冲洗 30-60分钟，然后在无菌室（超净工作台）内用70%酒精浸没20-40秒钟（根据材料的木质化程度掌握具体的浸没时间。用0.2% 的升汞溶液浸泡10-15分钟，再用无菌水冲洗3-4次，放入已灭菌的培养皿中的滤纸上待用。

2 接种 先进行无菌室内消毒，用紫外灯照射30-45分钟，地面用低浓度的来苏尔溶液消毒，紫外灯关闭约20分钟后方可进去工作。

超净工作台消毒 开启无菌风开关，让无菌风吹上30-45分钟后方可工作。并用70%的酒精棉球擦净工作台。

接种时先点燃酒精灯，镊子和剪刀都要先浸泡在70%的酒精溶液中。用酒精灯上灼烧好冷却后的镊子、剪刀取出一个侧芽或小段茎，迅速打开三角瓶口，将材料才插入瓶内，注意材料上下端的极性，不能倒插。在酒精灯边塞回锡箔纸，用记号笔在瓶体上写明日期和材料。

3 培养条件： 25℃光照13小时/天 光强1000 Lux

4 继代培养（见下一个实验）

5 诱导生根：用低浓度的吲哚乙酸或者萘乙酸或无激素的N6培养基诱导生根

6 试管苗移栽〈参见有关其它实验〉

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